產(chǎn)品信息

目錄號 #60010

EtO（環(huán)氧乙烷）滅菌處理

每盒 10 個設(shè)備（設(shè)備單獨包裝，每個密封袋中有 1 個小窺器和 1 個大窺器。）

信息：非手術(shù)胚胎移植方法和裝置9,615,903。 [ PDF ]

有可能的使用

該裝置用于將小鼠胚胎經(jīng)子宮頸移植到受體雌性小鼠中。僅用于研究目的。 不適用于人類或動物的診斷或治療用途。

其他用途：mNSET 60010 設(shè)備還可用于人工授精 (AI) 或其他材料/病原體轉(zhuǎn)移到受體雌性小鼠中。

處理

設(shè)備僅供一次性使用。使用后丟棄。

在 mNSET 胚胎移植之前

為了生產(chǎn)用于移植的小鼠胚胎和作為受體的假孕雌性，使用標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因方法。1 與標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因程序中的雄性和雌性小鼠交配。如果需要，女性捐贈者可以超排。胚胎在 EmbryoMax® KSOM 培養(yǎng)基 (Millipore#MR-106-D) 或所需的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在 mNSET 移植當(dāng)天，胚胎應(yīng)在性交后 3.5 天（3.5 dpc）；受體雌性小鼠在 mNSET 轉(zhuǎn)移當(dāng)天應(yīng)為 2.5 dpc。

mNSET 演示視頻

可以在此處查看和下載快速程序和完整程序演示視頻。快速程序視頻演示了使用 mNSET™（非手術(shù)胚胎和精z移植）小鼠裝置 60010 可以輕松完成小鼠子宮胚胎移植。完整的程序視頻詳細(xì)介紹了整個設(shè)置和準(zhǔn)備，直至實際程序結(jié)束.

胚胎移植程序

1. 將 15μl 培養(yǎng)基滴到 60 毫米組織培養(yǎng)皿（Falcon 353002 或類似產(chǎn)品）的蓋子上。

2. 使用標(biāo)準(zhǔn)胚胎處理移液器將 12–20 個囊胚加載到培養(yǎng)基中。（注意：要移植的最佳胚胎數(shù)量會因小鼠品系和胚胎接受的操作而異。）

3. 將 mNSET 裝置放在已設(shè)置為 1.8μl 的 P-2 Pipetman 上。（推薦的移液器是 Pipette Rainin Classic PR2，0.1-2μl 或 Gilson Pipetman P2，0.2-2μl。）

4. 將移液器柱塞按到第一次停止，將 mNSET 裝置的降低到培養(yǎng)基中，然后將胚胎慢慢拉入尖。從介質(zhì)中取出 mNSET 設(shè)備尖。

5. 小心地將移液器設(shè)置為 2.0μl，在 mNSET 尖產(chǎn)生一個小氣泡，以幫助確保胚胎在插入鼠標(biāo)期間留在設(shè)備尖內(nèi)。輕輕地將裝有吸頭的移液器放在一邊（靠近籠子），以便在第 9 步中使用。避免推擠 mNSET 尖。

6. 將未麻醉的雌性接受者放在帶有金屬絲架的籠子頂部，讓鼠標(biāo)“抓住"籠桿表面。用拇指和食指抓住尾巴根部，將尾巴向上傾斜，同時用手的另一邊輕輕按壓尾巴根部。（見下圖。）

以下是來自我們的科學(xué)家、技術(shù)人員和客戶的提示和建議，這些提示和建議已被證明是有幫助的。

1. 在開始 mNSET 試用之前，請仔細(xì)閱讀所有“有用的提示"和 mNSET for Mice 60010 說明插入。 在 NSET 的每個盒子中都可以找到說明插頁。

2.在實際實驗之前，在沒有胚胎的 2.5 dpc 假孕小鼠上練習(xí) mNSET 技術(shù)。

3. mNSET 設(shè)計為緊貼在 Rainin Classic PR2, 0.1-2µl 或 Gilson Pipetman P2, 0.2-2µl 移液器上，用于裝載胚胎和將培養(yǎng)基精確測量到設(shè)備的尖。

4.我們建議使用有意識、冷靜和不激動的小鼠。這樣可以更容易地讓鼠標(biāo)處于自然位置以找到并進(jìn)入子宮頸。我們網(wǎng)站上視頻中的雌性老鼠沒有被鎮(zhèn)靜。

5.我們使用 CD1 小鼠，并強(qiáng)烈建議將這種品系用于您的假孕受體。我們建議使用體重≥26g 且至少 60 天大的小鼠。

6.胚胎應(yīng)培養(yǎng)到囊胚階段 (e3.5)，因為該裝置將它們轉(zhuǎn)移到子宮角之一而不是輸卵管。一些最終用戶已成功使用桑椹胚。

7.選擇一種您使用過的培養(yǎng)基，它能讓您在胚胎孵化過程中取得最大成功。例如，使用 M2 或 KSOM 培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移 12 到 20 個胚胎。

8. mNSET 裝置只能在假孕小鼠的某些發(fā)情期和 2.5 dpc 時通過子宮頸。因此，我們強(qiáng)烈建議使用 2.5 dpc 假孕小鼠（在插頭脫落后）進(jìn)行訓(xùn)練和使用 mNSET 設(shè)備進(jìn)行胚胎移植。

9.我們發(fā)現(xiàn)通過將鼠標(biāo)放在帶有金屬絲架的籠子頂部，讓雌性保持靜止并減少蠕動相對容易，這樣她就可以抓住籠桿表面。使用 mNSET 說明 #6 中描述的保持技術(shù)，并在我們網(wǎng)頁上的 mNSET 視頻中進(jìn)行演示：https ://paratechs.com/collections/art-devices/products/nset-device-formice#mnset-60010 -視頻。

10. 我們不推薦使用潤滑劑。您可以使用無菌水或培養(yǎng)基潤濕窺器，然后在插入陰道之前抖掉多余的部分。

11.將小窺器輕輕插入陰道。鼠標(biāo)會先天地將窺器推出一點。輕輕將其按回原位，以便 mNSET 裝置可以穿過子宮頸并進(jìn)入其中一個子宮角。

12.可選：取下小窺器，換上大窺器。如果需要，使用足夠的光源，例如鵝頸燈，并觀察子宮頸。

13.使用 NSET 尖找到并刺入子宮頸時，請耐心等待，不要施加太大壓力。這可能會導(dǎo)致組織損傷，并且可能會彎曲 mNSET 設(shè)備尖，使其幾乎無法使用。如果第一次嘗試插入 mNSET 的位置不正確，請輕輕地重新定位設(shè)備并重復(fù)。

14.如果在尋找宮頸開口時施加的壓力過大導(dǎo)致尖彎曲，則可能會導(dǎo)致胚胎丟失。同樣，溫和的重復(fù)嘗試與 mNSET 的成功有關(guān)。

15.當(dāng) mNSET 設(shè)備的輪轂接觸到窺器末端時，您就會知道設(shè)備已通過子宮頸正確插入子宮。

16.要排出胚胎，請將移液器柱塞按到第一檔。數(shù)到 3。不要松開柱塞。

17. 在 不松開移液管柱塞的情況下緩慢取出 mNSET 。如果在移除之前釋放柱塞，一些胚胎可能會被拉回尖。

18.使用后在顯微鏡下檢查 mNSET 尖是一種很好的做法。清晰的尖 mNSET 允許在尖內(nèi)部進(jìn)行可視化。

該設(shè)備專為一次性使用而設(shè)計。重復(fù)使用會用宮頸組織堵塞 mNSET 尖。重復(fù)使用可能會使導(dǎo)管變得柔韌，并且不再足夠堅硬以通過子宮頸。因此，可能將胚胎存放在陰道中，而不是按預(yù)期放置在子宮角中。

1. 我可以重復(fù)使用 mNSET 設(shè)備將胚胎移植到多只小鼠中嗎？

ParaTechs 不建議使用 mNSET 設(shè)備進(jìn)行多次傳輸。來自小鼠生殖道的組織往往會堵塞導(dǎo)管。重復(fù)使用還會使導(dǎo)管變得柔韌，不再足夠堅硬以通過子宮頸，從而將胚胎存放在陰道中。當(dāng)設(shè)備多次使用時，胚胎移植的成功率可能會明顯下降。

2. 我應(yīng)該使用什么小鼠品系作為我的胚胎受體？

ParaTechs 推薦 CD1 或 ICR 小鼠。為獲得最佳效果，接受者的體重應(yīng)≥ 26 克且年齡應(yīng)超過 60 天。

3. 受體小鼠應(yīng)在性交后（dpc）哪天？

我們強(qiáng)烈建議使用2.5 dpc 假孕小鼠進(jìn)行訓(xùn)練和使用 mNSET 設(shè)備進(jìn)行胚胎移植。mNSET 設(shè)備有可能通過假孕小鼠 1.5 dpc 的子宮頸。然而，當(dāng)時胚胎移植的成功率已證明低于使用推薦的 2.5 dpc 假孕女性。

4. 我的胚胎應(yīng)該在哪個發(fā)育階段進(jìn)行移植？

胚胎應(yīng)該比假孕女性的生殖道處于更晚的發(fā)育階段。例如，囊胚（受精后 e3.5 天）應(yīng)轉(zhuǎn)移到 2.5 dpc 假孕受體中。

5. 執(zhí)行 mNSET 程序是否需要麻醉？

沒有。ParaTechs 不建議使用麻醉。可以放置一個平靜有意識的動物，以便 mNSET 裝置導(dǎo)管可以輕松通過子宮頸。我們網(wǎng)站上演示視頻中的鼠標(biāo)沒有被麻醉：https : //paratechs.com/collections/art-devices/products/nset-device-for-mice#mnset-60010-videos。使用未麻醉的小鼠還可以使手術(shù)更快、更容易，同時消除麻醉的風(fēng)險和壓力。1 麻醉可能有助于訓(xùn)練目的，但不需要在普通條件下使用。

6. 在 mNSET 過程中我應(yīng)該使用潤滑劑嗎？

不會。潤滑劑會堵塞 mNSET 導(dǎo)管并阻止胚胎正確放置在子宮角中。在插入之前，窺器可能會用無菌水或培養(yǎng)基潤濕，但這也是不必要的。如果弄濕了窺器，在將設(shè)備插入陰道之前一定要抖掉多余的水分。

7. 我無法定位和穿過子宮頸。我該怎么辦？

確保您的受體女性是 2.5 dpc 假孕。在插入 mNSET 導(dǎo)管之前，使用鵝頸燈檢查和定位宮頸開口，因為這將幫助您正確定位設(shè)備。在嘗試胚胎移植之前，練習(xí)穿過 2.5 dpc 假孕女性的子宮頸可能會有所幫助。

8. 我應(yīng)該將多少胚胎移植到每只受體小鼠中？

對于大多數(shù)轉(zhuǎn)移，ParaTechs 建議將12-20 個胚胎轉(zhuǎn)移到每只受體小鼠。（注意：移植的最佳胚胎數(shù)量會因小鼠品系和胚胎接受的操作而異。）

9. 我進(jìn)行了非手術(shù)胚胎移植，但是當(dāng)我移除 mNSET 裝置時，導(dǎo)管彎曲了。發(fā)生了什么？

彎曲的導(dǎo)管可能意味著導(dǎo)管沒有進(jìn)入子宮頸，或者您在嘗試定位子宮頸開口時施加了太大的壓力。如果導(dǎo)管彎曲，則胚胎不太可能沉積到小鼠的子宮角中。定位宮頸口時使用溫和的壓力很重要。

10. 我可以多次使用小鼠作為胚胎受體嗎？

ParaTechs 的研究表明，可以對女性接受者執(zhí)行多個 mNSET 程序并獲得多達(dá)三窩。然而，第一胎后妊娠率和胚胎移植效率有所下降。

11. mNSET 設(shè)備可以用于人工授精 (AI) 嗎？

是的。mNSET 設(shè)備也可用于將精z輸送給受體雌性小鼠以促進(jìn) AI。2 請參閱下面由 Stone 等人撰寫的文章。(2015)。

12. mNSET設(shè)備是否有其他應(yīng)用？

是的。mNSET 設(shè)備還可用作有效轉(zhuǎn)移物質(zhì)以用于子宮生理學(xué)和細(xì)菌感染研究的新方法