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kurabiotec BG100說明書

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kurabiotec BG100說明書

 

產品:BG100

版本:3.0,2019年1月

BG100®β-葡萄糖醛酸酶

紅鮑

EC編號:3.2.1.31

中國科學院編號:9001-45-0

產品代碼:BG100-10ml,BG100-25ml,BG100-50ml

產品描述

BG100®是一種來源于紅鮑魚內臟的軟體動物β-葡萄糖醛酸酶。在用酶法、免疫分析法、質譜法、色譜法等方法進行分析之前,它已被用于從尿液和其他基質如胎糞中酶解葡萄糖醛酸。與許多來源于軟體動物的葡萄糖醛酸酶一樣,BG100®也含有一些硫酸酯酶活性。

BG100®比螺旋藻、外陰髕骨、甚至是普通鮑魚來源的β-葡萄糖醛酸酶具有更廣泛的亞速率適應性和更高的效率。耐高溫,

BG100®允許用戶在更高的溫度下進行孵化,在更短的時間內實現*水解,特別是在嗎啡-3-g、可待ying-6-g或諾丁丙諾非等難以分解的代謝物中。

由于部分純化,BG100®有助于簡化樣品制備,避免色譜柱堵塞,并通過減少背景噪聲干擾提高分析質量。

 

產品概述

產品形態:液體

溫度范圍:55-80°C

宜溫度:68°C

pH范圍:4.0-5.0

宜ph值:4.8

分子質量:~280kDa

儲存/穩定性:2-8°C至少12個月

葡萄糖醛酸酶活性≥100000 U/ml

活動單元定義:一個單元將解放

在pH值為5.0和37°C時,每小時從酚酞葡萄糖醛酸中提取1.0μg酚酞(30分鐘測定)

硫酸酯酶活性:≤8000 U/ml

活性單位定義:一單位硫酸酯酶

在pH 5.0和37°C下每小時水解1.0μmole對硝基鄰苯二酚

BG100®分步水解

協議

1。可選的尿液樣本離心,4°C,20000 x g,5分鐘。

2。吸管100μl尿樣。

三。根據表1添加緩沖液+BG100?+ISD+蒸餾水。

4。輕輕但*地混合。

5。在68℃下孵育45分鐘。更多孵化時間見表2。

6。在25000 x g下離心10分鐘。

 

筆記

•上述方案以100μl的初始尿量為基礎。通過保持給定的比例,混合物可以適應任何所需的尿量。

•保持低酶尿比1:4很重要,以便

在表2所示的時間內達到預期的回收率,無論是在加標尿液中還是在真實樣本中。

•必須將尿液稀釋至少3至4倍,以優化酶活性。(速度是2倍)。

•終混合物中緩沖液的摩爾濃度應在120至170 mm范圍內,以達到宜水解速度。在較低或較高的摩爾濃度下,速度降低。

•混合物中甲醇含量不得超過5%。

•可制備含有緩沖液、酶、水和ISD的主混合物,以簡化工作流程。保持冷藏(2至8攝氏度)。

每天準備新鮮的。不要凍僵。

參考文獻

1。Marin,S;Neifeld,J;Menasco,D;Gairloch,E.(2017年)。海報:三種β-葡萄糖醛酸酶的評價,以確定臨床毒理學和疼痛管理中尿樣的宜水解條件。

2。Jagerdeo,E和Schaaff,J.(2016年)。用超液相色譜/軌道質譜儀快速篩選生物液體中的藥物或濫用,色譜學雜志B,1027,11-18。

三。關穎珊、麥肯尼、席爾瓦、拉比亞和羅薩斯。(2016)法醫毒理學學會。海報:使用第二代酶簡化樣品制備。

四。Schedweiler,K;Sempio,C.等人。(2016)法醫毒理學學會。海報:重組大腸桿菌“uglucuronidase”對人尿中8種大麻素的水解優化。

五。Derosiers,N;Scheidweiler,K;Huestis,M.(2015年)。液相色譜-串聯質譜法測定口服液中6種大麻素及其代謝產物的含量。J.藥物測試和分析,7655-736。

六。Ellis,K;McConnell,K.等人。(2015)海報:可待ying和嗎啡葡萄糖醛酸在尿液中的快速酶解。

 

 

 

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